人 5 羟色胺ELISA 定量检测试剂盒：科研领域的有力工具

来源：优游ub8平台登录入口    发布时间：2025-01-02 07:02:17

  在科研探索的征程中，准确测定人 5 羟色胺（5 - HT）的含量对于进一步探索神经生物学、精神疾病等多个领域具备极其重大意义。人 5 羟色胺（5 - HT）定量检测试剂盒（ELISA）专为科研设计，可以在一定程度上完成对血清、血浆、细胞培养上清液以及组织中人 5 羟色胺含量的精准定量检测。为确保实验的顺利进行与结果的可靠性，使用者务必仔细研读本说明书，并严格遵循各项操作要求。

  本试剂盒使用先进的酶联免疫分析方法。以纯化的抗 5 - HT 抗体包被微孔板，运用生物素标记 5 - HT。在竞争抑制反应中，一定量的固相抗体与生物素标记 5 - HT 及非标记抗原（校准品或标本）展开抑制竞争。非标记抗原量的多少会抑制抗体与生物素标记的 5 - HT 的结合量，即非标记抗原量越多，抗体与生物素标记的 5 - HT 结合就越少，反之则越多。反应平衡后，形成固相抗体 - 生物素化 5 - HT，再加入酶标记的亲和素，进而形成固相抗体 - 生物素化 5 - HT - 酶标 - 亲合素复合物。加入底物显色后，通过酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值）。随着 5 - HT 浓度的升高，OD 值逐渐下降，呈现出良好的线性关系。该试剂盒具备灵敏度较高、特异性强、重复性好、简单易操作、快速等诸多优点，能可靠地检测出血清中 5 - HT 的增减变化。

  本试剂盒仅供科研使用，严禁用于临床诊断，这是确保其使用合法性和实验结果科学性的重要前提。

  必须在试剂盒标示的有效期内使用，过期产品可能因试剂变质等问题造成实验结果不准确，因此不得使用。

  为保证实验结果的准确性和可靠性，本试剂盒不能与其他厂家的试剂盒或者组分混用，以免发生化学反应或干扰，影响检测结果。

  若样品需要稀释，可使用 PBS（PH7.4）进行稀释，以维持样品的稳定性和适宜的反应环境。

  若样本值高于最高标准品浓度值，需将样本适当稀释后再重新测定，确保检验测试结果在准确的范围内。

  待测样本中有几率存在的异嗜抗体会干扰检测结果，检测前务必排除该因素，以获得可靠的实验数据。

  通过其他方法得到的检测结果与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性，因为不同检测的新方法的原理、灵敏度等存在差异。

  混合蛋白溶液时，应避免起泡，因为气泡可能会影响溶液的均匀性和反应的准确性。

  加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分采用悬臂加样，防止交叉污染，确保实验数据的可靠性。

  合适的温育时间和充分的洗涤步骤是保证实验结果准确性的必要条件，温育时间不足或洗涤不充分都可能会引起误差。

  使用自动洗板机时，加入一个 30 秒浸泡的步骤，有助于提高检测精度，更有效地去除杂质。

  底物溶液为无色液体，若在保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用，以免影响实验结果。

  终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物会瞬间变为黄色，这是实验中的重要现象，需严格按照顺序操作。

  实验中用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封并在低温干燥环境下保存，以保持板条的性能稳定。

  所有液体组分使用前要充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作，确保实验操作的规范性和准确性。

  未开封的试剂盒需保存在 2 - 8 度的环境中，过期试剂盒不得使用。试剂盒包含多种关键组分：

  ：0.5ml / 管 * 6 管，由抗原配制的 6 个浓度标准品，浓度依次为 800、400、200、100、50、0 ng/mL，为绘制标准曲线提供准确的浓度参考。

  ：有 96T/48T 两种规格，预包被固相抗体，为抗原 - 抗体反应提供固定的平台。

  ：6mL，HRP 标记的检测抗体，参与复合物的形成，对检测起到关键作用。

  ：6mL，TMB 工作液，在 HRP 的催化下发生颜色变化，直观反映 5 - HT 的含量。

  ：6mL，2mol/L 稀释液，用于终止显色反应，使实验结果稳定可测。

  ：30mL，含 0.15% Tween20 的 PBS，稀释后用于洗板，去除未结合的物质。

  同时，本品一定要按照具有潜在的感染性做处理，处理过程应当遵循通用的安全措施，以保障实验人员的安全和实验环境的卫生。

  检测过程一定要符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染。所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置，以保障实验室的生物安全。

  试剂盒的液体组分中含有 proclin - 300 防腐剂，可能会导致皮肤过敏反应，实验过程中应避免吸入烟雾与皮肤接触，做好防护措施。

  底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，同样要避免吸入烟雾，确保实验人员的安全。

  实验过程中应戴上防护手套，实验完成后彻底洗手，防止有害于人体健康的物质对人体的伤害。

  ：在 4000rpm 条件下离心 20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在 20℃以下，避免反复冻融，以保持样本的稳定性。

  ：使用不含热原和内毒素的试管，操作的流程中避免任何细胞刺激，在 4000rpm 条件下离心 20min，小心地分离出血清，保存在 - 20℃以下，防止样本变质。

  ：采用肝素、EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，在 4000rpm 条件下离心 20 分钟取上清，血浆同样保存在 - 20℃以下，避免反复冻融。

  ：用预冷的 PBS (0.01 M，pH = 7.4) 冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。按照 1 : 9 的重量体积比（可根据实验需要调整），将剪碎的组织与含蛋白酶抑制剂的 PBS 加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为进一步裂解组织细胞，可对匀浆液进行超声破碎或反复冻融。最后将匀浆液 5000×g 离心 5 - 10 分钟，取上清检测。

  样本在 2 - 8℃条件下，可以储存 72h，或者在 - 20℃储存 6 个月。若样本收集后不是一次检测完，应按一次用量分装冻存，避免反复冻融。使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻，以保证检测结果的准确性。

  将各种试剂移至室温平衡两小时，使试剂达到最佳反应状态。取浓缩洗涤液，根据当批检验测试数量，用蒸馏水 1：20 稀释，混匀后备用。

  从密封袋中取出预包被板，设一个空白对照孔，不加任何液体；每个校准品设 2 孔，每孔加入对应校准品 50μl；其余每个检测孔直接加待测血清或质控品 50μl。

  除空白孔外，所有孔加入生物素化抗原 50μl，混匀后贴上封板膜，置于 37℃温育 60 分钟，促进抗原 - 抗体反应充分进行。

  手工洗板时，弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置 10 秒甩干，重复 3 次后拍干；若使用洗板机，则选择洗涤 3 次程序洗板后拍干，确保洗板效果。

  每孔加入酶标亲合素 50μl（空白对照孔除外），混匀后贴上封板膜，再次置 37℃温育 30 分钟，形成稳定的复合物。

  每孔加显色剂 A 50μl，显色剂 B 50μl，振荡混匀后，置 37℃避光显色 15 分钟，使颜色变化充足表现 5 - HT 的浓度。最后每孔加终止液 50μl，用酶标仪读数，取波长 450nm，先用空白对照孔调零点，然后测定各孔光密度值（OD 值）。

  检测完成后，以标准品浓度做为纵坐标，对应的吸光度（OD 值）作为横坐标，利用计算机软件，采用四参数 Logistic 曲线 - pl），创建标准曲线方程。通过样本的吸光度（OD 值），利用方程计算样品的浓度值。若样品被稀释，通过上述方法测得的浓度值要乘以稀释倍数，才是样品的最终浓度。

  ：液体组分应澄清，无沉淀或絮状物；所有组分应无包装破损，各组分装量不少于组分表中要求，确保试剂盒的质量和可用性。

  ：用四参数 Logistic 曲线 - pl），剂量 - 反应曲线相关系数（r）的绝对值应不低于 0.9900，表明试剂盒拥有非常良好的线性关系，检测结果可靠。

  ：批内精密度要求三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度评估，批内变异系数 CV% 小于 15%；批间精密度要求三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估，批间变异系数 CV% 小于 15%，体现了试剂盒在不同条件下的稳定性和重复性。

  ：最低检出限应不高于 1.0 ng/mL，能够检测出低浓度的 5 - HT，满足科研对灵敏度的要求。

  ：三组已知的高、中、低浓度样品，进行五次在同一个板块内回收率评估，回收率在 85% - 115% 之间，说明试剂盒的检测结果具有较高的准确性和可靠性。

  ：在 2℃ - 8℃保存，有效期为 6 个月，保证了试剂盒在一段时间内的性能稳定。

  ：50 - 800 ng/mL，能够覆盖一定浓度范围的 5 - HT 检测，满足多种科研需求。

  遵循以上使用指南，科研人员能够正确、规范地使用人 5 羟色胺（5 - HT）ELISA 定量检测试剂盒，为相关科研工作提供准确、可靠的数据支持，推动科研事业的发展。